藥物的親脂性或疏水性影響著藥物在細胞膜的滲透性，油水分配系數和平衡溶解度是反映藥物脂溶性的2個不可或缺的重要理化參數，這2個重要理化參數對研究藥物的體內過程和指導臨床用藥具有重要的意義[1-3]。

　　[摘要]目的：測定白頭翁皂苷D的油水分配系數及其在不同溶劑中的平衡溶解度。方法：采用搖瓶法與高效液相色譜法相結合測定白頭翁皂苷D的油水分配系數，采用高效液相色譜法測定白頭翁皂苷D在6種有機溶劑及不同pH緩沖液中的平衡溶解度。結果：白頭翁皂苷D在不同pH條件下油水分配系數大于零，隨著pH升高白頭翁皂苷D的平衡溶解度逐漸增加，在不同溶劑中白頭翁皂苷D的平衡溶解度以甲醇最大（達到255.89g・L-1），乙腈中最小（0.20g・L-1）。結論：在胃腸生理條件下，白頭翁皂苷D以分子狀態形式存在，由lgPapp可知其吸收性較好，但水溶性較差，提示增加白頭翁皂苷D的溶解度可能有利于提高其生物利用度。

　　[關鍵詞]中國全科醫學雜志投稿,HPLC,白頭翁皂苷D,油水分配系數,平衡溶解度

　　白頭翁皂苷D[4]（PulsatillasaponinD，PSD）是從白頭翁中分離出來的一種常春藤皂苷，對HL-60腫瘤細胞和LLC腫瘤細胞具有很強的抑制作用[5-6]，筆者前期研究亦發現其對人肝癌細胞SMMC-7721、人結直腸腺癌細胞HCT116等腫瘤細胞具有較強的活性，說明白頭翁皂苷D具有成藥性的可能。由于白頭翁皂苷D的平衡溶解度和表觀油水分配系數未見相關報道，同時，為了進一步開展白頭翁皂苷D體內吸收過程及劑型研究，本文通過對白頭翁皂苷D平衡溶解度和表觀油水分配系數的測定以期為白頭翁皂苷D劑型合理選擇及藥動學研究提供參考。

　　1材料

　　白頭翁皂苷D對照品（中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心對照品室提供，經MS，NMR鑒定、HPLC測定，純度在99%以上）；甲醇（上海振興化工一廠，色譜純）；磷酸二氫鈉（汕頭市西隴化工廠有限公司）；正辛醇（汕頭市西隴化工廠有限公司，分析純）；其他試劑均為分析純。

　　高效液相色譜儀：Agilent1260色譜泵，二級管陣列檢測器（DAD），美國安捷倫科技公司；KQ-4000B型超聲清洗機（鞏義市予華儀器有限責任公司）；AL204電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；TDL-40B飛鴿牌臺式離心機（上海安亭科學儀器廠制造）；HH-2數顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司）；SHZ-82氣浴恒溫振蕩器（常州國華電器有限公司）；MilliporeSynergy超純水系統（美國密理博公司）。

　　2方法與結果

　　2.1樣品的制備

　　2.1.1正辛醇水飽和液的制備精密吸取200mL正辛醇至500mL具塞錐形瓶，加水200mL，置磁力攪拌器上，攪拌24h，靜置，備用。

　　2.1.2不同pH緩沖液的制備按《中國藥典》（2010年版二部）附錄ⅩⅤD緩沖液的配制方法，分別配制pH為2.0，5.0，5.8，6.8，7.0，7.6的磷酸鹽緩沖液[7]。另稱取氯化鈉2g、量取濃鹽酸7mL至1000mL量瓶中，加水稀釋至刻度配成pH1.2的緩沖液。

　　2.1.3對照品溶液的制備精密稱取白頭翁皂苷D對照品（五氧化二磷減壓干燥24h）13.6mg，置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配制成0.544g・L-1的對照品溶液。

　　2.2白頭翁皂苷D的含量測定

　　2.2.1檢測波長的選擇取白頭翁皂苷D對照品溶液，以甲醇為空白樣品，采用紫外分光光度法在190～400nm進行全波長掃描，白頭翁皂苷D在203nm處有最大吸收，因此選擇203nm作為白頭翁皂苷D的檢測波長。

　　2.2.2色譜條件與系統適用性試驗Agilent1260，大連依利特HyperisilODS2C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流動相甲醇-水-甲酸（75∶25∶0.1），流速1.0mL・min-1，柱溫30℃，紫外檢測波長203nm。理論塔板數按白頭翁皂苷D計算不低于3000，分離度大于1.5，色譜圖見圖1。

　　2.2.3線性關系考察取白頭翁皂苷D對照品溶液液（0.523g・L-1），分別進樣1，2，5，10，15，20μL。按2.2.2項下色譜條件進行測定，分別記錄白頭翁皂苷D的峰面積。以進樣濃度（Y）為橫坐標，峰面積（X）為縱坐標作圖并進行線性回歸，得線性方程Y=3320.1X-8.9146，r=0.9999（n=6），結果表明白頭翁皂苷D進樣質量濃度在0.0523～1.0460g・L-1呈良好線性關系。

　　2.2.4精密度試驗精密吸取白頭翁皂苷D對照品溶液，按上述色譜條件連續進樣6次，每次進樣10μL分別記錄峰面積，結果RSD1.6%，說明該方法精密度良好。

　　2.2.5穩定性試驗取已知不同表觀油水分配系數及不同溶劑下的供試品溶液，分別在0，1，2，6，12，24h條件下取樣，按上述色譜條件進樣10μL進行檢測并記錄峰面積，結果RSD均小于2%，表明所有供試品溶液在24h內基本穩定。

　　2.3白頭翁皂苷D表觀油水分配系數的測定

　　精密稱取白頭翁皂苷D樣品0.0264g，置50mL水飽和的正辛醇溶液，超聲溶解，離心15min（4000r・min-1），備用。精密吸取含白頭翁皂苷D的水飽和正辛醇2mL，置10mL具塞塑料管中，分別加入2mL正辛醇飽和水及不同pH的磷酸鹽緩沖液，將具塞塑料管放入恒溫振蕩器中，控制溫度（25±1）℃，振搖72h直至平衡，4000r・min-1離心10min，取上層正辛醇溶液，按照上述色譜條件進樣10μL進行測定，記錄峰面積。分別計算其濃度，并按下式計算表觀油水分配系數。Papp=（CV-CwVw）/CwVw，式中Papp為白頭翁皂苷D的表觀油水分配系數；C為正辛醇中白頭翁皂苷D的初始濃度，V為水飽和正辛醇的體積（即2.0mL）；Cw為分配平衡時白頭翁皂苷D在水相中測得的濃度，Vw為水相體積（即2.0mL）。按照公式計算不同pH磷酸鹽緩沖溶液中表觀正辛醇/緩沖溶液分配系數，結果見表1。結果顯示，pH在1.2，5.0，6.0，6.8，7.0，7.6時，其lgPapp均大于零，可以預測在此pH條件下該化合物親脂性較強，當pH為6.8時其Papp為7.48，lgPapp=0.87，說明在此pH條件下有利于吸收。

　　2.4白頭翁皂苷D溶解度的測定

　　取過量白頭翁皂苷D于10mL具塞試管中，分別加以下2組介質5mL：①有機溶劑組，包括乙醇、甲醇、乙腈、丙酮、正丁醇、二氯甲烷；②緩沖溶液組，pH分別為1.2，2.0，4.0，5.8，6.8，7.6，于25℃空氣振蕩器中振搖，分別在不同時間點取樣，1萬r・min-1離心15min后，根據線性范圍采用甲醇對樣品進行適當稀釋，按上述色譜條件進樣10μL，記錄峰面積，計算白頭翁皂苷D在各介質中的含量，并計算其在不同介質中的平衡溶解度。結果見圖2，3。

　　由圖2可知，白頭翁皂苷D在不同pH緩沖溶液中隨著pH不斷升高，溶解度逐漸增加，當pH為7.6時，其平衡溶解度達到0.38g・L-1；由圖3可知，白頭翁皂苷D在不同介質中的平衡溶解度以甲醇為最大，達到255.89g・L-1，在乙腈中最小僅為0.20g・L-1。

　　3討論

　　根據白頭翁皂苷D的分子結構可知，白頭翁皂苷D在堿性條件下易形成鹽，會改變其溶解性，從而導致測定結果不準確，故選擇在不同消化道的生理pH條件下測定其表觀溶解度及油水分配系數。

　　油水分配系數測定的方法有搖瓶法、產生柱法以及高效液相色譜法[8-13]。由于產生柱法測定過程繁雜、平衡時間太長，反相高效液相色譜法需采用已知P值的同系物對照品來建立標準曲線，費用高，而經典的搖瓶法操作簡單、成本低[14]，所以采用搖瓶法測定白頭翁皂苷D的油水分配系數。此外，因白頭翁皂苷D的分子結構中具有五環三萜類的母核使其具有較高的脂溶性，而分子中又含有1個由3個單糖組成的糖鏈和母核上連結的羧基又使其具有一定的水溶性，故在油水分配體系的選擇過程中，應選擇更接近生物相、極性和溶解性均較好的正辛醇為油相[15]。所以，本實驗選用正辛醇-水系統作為其最佳油水分配體系。

　　在測定白頭翁皂苷D的平衡溶解度過程中，本實驗主要根據不同時間點樣品濃度變化和試管壁上附著過量的白頭翁皂苷D為指標，確定白頭翁皂苷D是否達到平衡。由白頭翁皂苷D在不同介質中的平衡溶解度可知，白頭翁皂苷D溶解性較差，難以有效地被機體吸收，從而導致其生物利度較差。白頭翁皂苷D在不同緩沖鹽溶液中隨pH升高其溶解度不斷增加，這可能與其結構上含有羧基有關，白頭翁皂苷D在堿性條件下易形成鹽，并隨著堿鹽增加其溶解度升高，故可以考慮通過讓其形成鹽提高溶解度，從而提高生物利用度。

　　根據本實驗對白頭翁皂苷D平衡溶解度及油水分配系數的測定結果可知其水溶性較差，根據文獻，藥物lgPapp在-1～1時藥物吸收較好[16]，該結果說明機體對白頭翁皂苷D的吸收性較好。按照BCS（biopharmaceuticsclassificationsystem）分類可知，白頭翁皂苷D屬于低溶解度、高透過性的藥物，所以，研制白頭翁皂苷D口服制劑的關鍵在于增加藥物在體內的溶出度，進而有利于提高其生物利用度。

　　[參考文獻]

　　[1]曹穎，李永吉，呂邵娃，等.丁香苦苷解離常數及油水分配系數的測定[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（23）：65.

　　[2]林杭娟，欽富華，高建青.熊果酸平衡溶解度和油水分配系數的測定[J].中國現代應用藥學，2012，29（7）：635.

　　[3]BernardTesta，HanvandeWaterbeemd，GerdFolkers，etal.Pharmacokineticoptimizationindrugresearch[M].Berlin：VerlagHelveticaChimicaActa，2001：778.

　　[4]SamSikKang.SaponinsfromtherootsofPulsatillakoreana[J].ArchPharmRes，1989，12（1）：42.

　　[5]YoshihiroMimaki.TriterpenesaponinsandlignansfromtherootsofPulsatillachinensisandtheircytotoxicactivityagainstHL-60cells[J].JNatProd，1999，62：1279.

　　[6]YongKim.PulsatillasaponinD：theantitumorprinciplefromPulsatillakoreana[J].ArchPharmRes，2004，127（9）：915.

　　[7]中國藥典.一部[S].2010：附錄111.

　　[8]張婷婷，徐文，胡生亮，等.水飛薊賓在不同介質中平衡溶解度和表觀油水分配系數的測定[J].中國藥學雜志，2006，41（2）：1569.

　　[9]楊秀麗，孫進，何仲貴.格列吡嗪油水分配系數和平衡溶解度的測定[J].中國藥劑學雜志，2009，7（3）：121.