醫生在評職稱的時候都需要發表一些醫學職稱論文，不同科室的醫生對醫學的研究方向也不相同。本文是小編給大家推薦的一篇醫學期刊投稿的論文范文，主要針對流式細胞儀檢測缺鐵性貧血患者淋巴細胞免疫表型進行了一些探討。

　　【摘要】 目的 研究缺鐵性貧血(IDA)患者外周血淋巴細胞免疫表型的變化。方法 30例缺鐵性貧血患者(IDA組)和30例健康體檢者(正常對照組)， 均應用流式細胞儀三色直接免疫熒光法檢測淋巴細胞免疫表型。對兩組外周血淋巴細胞免疫表型進行比較。結果 IDA組外周血中CD3+、CD3+CD4+及CD4+/CD8+比值顯著低于正常對照組(P<0.01)， CD3+ CD8+值高于正常對照組(P<0.05)。結論 缺鐵性貧血患者影響機體T細胞的增殖分化， 導致細胞免疫功能障礙和免疫調節機制紊亂。

　　【關鍵詞】 缺鐵性貧血,淋巴細胞免疫表型,流式細胞儀,骨髓細胞學檢查

　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.14.009

　　Investigation of flow cytometry in examination of lymphocyte immunophenotyping in iron-deficiency anemia patients YANG Hong， MENG Yan， WANG Chao. Department of Inspection， Beijing Fengtai Hospital， Beijing 100070， China

　　【Abstract】 Objective To research the changes of lymphocyte immunophenotyping in iron-deficiency anemia (IDA) patients. Methods There were 30 iron-deficiency anemia patients (IDA group) and 30 healthy people (normal control group)， and they all received flow cytometry three-color direct immunofluorescent method for detection of lymphocyte immunophenotyping. Comparison was made on the peripheral blood lymphocyte immunophenotyping between the two groups. Results IDA group had much lower levels of CD3+、CD3+CD4+， and CD4+/CD8+ ratio in peripheral blood than the normal control group (P<0.01)， and it also had higher CD3+ CD8+ value than the normal control group (P<0.05). Conclusion Iron-deficiency anemia may affect proliferation and differentiation of T lymphocyte， resulting in decreased immune functions and immune regulatory dysfunction.

　　【Key words】 Iron-deficiency anemia; Lymphocyte immunophenotyping; Flow cytometry; Marrow cytology examination

　　缺鐵性貧血是因機體鐵的需要量增加和鐵吸收減少， 使體內儲存鐵耗盡而缺乏， 又未得到足夠的補充， 導致合成血紅蛋白的鐵不足而引起的貧血[1]。是人類最常見的慢性疾病之一。淋巴細胞免疫表型是了解機體免疫系統功能的狀態。在正常機體內各淋巴細胞亞群的相互作用， 維護著機體正常的免疫功能， 當淋巴細胞亞群的數量和功能發生異常時， 都可導致機體免疫功能紊亂并發生一系列的病理變化[2]。淋巴細胞免疫表型的分析對一些疾病的診斷、治療、免疫功能重建、器官移植監測等有重要的臨床意義[3]。流式細胞儀檢測缺鐵性貧血與淋巴細胞免疫表型的關系， 國內外報道較少。現將本院2012年1月～2014年12月收治的30例IDA患者進行了外周血淋巴細胞免疫表型(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+及CD4+/CD8+)的檢測， 并與正常人對照。現報告如下。

　　1 資料與方法

　　1. 1 一般資料 30例IDA患者作為IDA組， 男5例， 女25例， 年齡23～81歲， 中位年齡46.5歲。血紅蛋白48～92 g/L， 紅細胞(3.24～4.76)×1012/L， 網織紅細胞0.1%～1.0%， 外周血紅細胞呈小細胞低色素性改變。骨髓細胞學檢查示：骨髓增生明顯活躍-活躍， 粒/紅比值1.91～4.37， 紅系增生活躍， 以中晚幼紅細胞為主， 晚幼紅細胞核固縮明顯。成熟紅細胞大小不等， 以小者居多， 中心淡染區明顯擴大。骨髓細胞鐵染色：外鐵(-)， 細胞內鐵為0～13%， 骨髓報告：符合缺鐵性貧血骨髓象。血清鐵2.51～11.5 mol/L， 血清鐵蛋白3.15～12.4 ng/L。全部病例服用鐵劑治療有效。另選健康體檢者30例作為正常對照組， 其中男10例， 女20例， 為血常規、血清鐵、鐵蛋白各項指標均在正常范圍內， 且無其他器質性病變。兩組一般資料比較， 差異無統計學意義(P>0.05)， 具有可比性。

　　1. 2 儀器與試劑 采用美國BD FACSCalibur流式細胞儀， 三色標記McAb：CD3FITC/CD4PE/CD45PerCP、CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP、紅細胞裂解液、熒光校準微球 calibrate 3 Beads均購自美國BD公司。 　　1. 3 方法

　　1. 3. 1 樣品的制備 各管分別加入CD3FITC/CD4PE/CD45 PerCP、CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP熒光抗體20 μl， 再分別加入新鮮EDTA-K3抗凝外周血100 μl， 混勻， 室溫避光孵育 20 min， 加入 1∶9 配制的溶血素 2 ml， 避光 10 min。2000 r/min 離心5 min， 倒掉上清液， 加入 PBS 緩沖液 2 ml， 2000 r/min 離心5 min。去上清， 加入500 μl PBS混勻待測。

　　1. 3. 2 流式細胞儀測定 以熒光微球calibrite 3-colour校準儀器補償、使儀器分辨率CV<2%達到最佳工作狀態， 采用MultiSET 軟件獲取數據。建立SSC/CD45Percp、CD4PE/CD3 FITC、SSC/CD3FITC熒光點圖， 用CD45-PerCP/SSC-Gating和Back-Gating 細胞群雙圈門以排除碎片的干擾， 調節 FSC、SSC、Detectors/Amps、Copensation， FL1-FL 2% 、FL2-FL 1% 熒光補償， 每管獲取1.5萬個細胞， 建立CD4+/CD3+、CD8+/CD3+散點圖， Th(CD4+)和Ts(CD8+)的表達情況， 同時計算出 Th/Ts 比值。

　　1. 4 統計學方法 應用SPSS11.0統計學軟件對研究數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差( x-±s)表示， 采用t檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

　　2 結果

　　IDA組外周血中CD3+、CD3+CD4+及CD4+/CD8+比值顯著低于正常對照組(P<0.01)， CD3+CD8+值高于正常對照組(P<0.05)。見表1。

　　3 討論

　　3. 1 缺鐵性貧血是一種全球性疾病， 雖然隨著現代物質生活條件的改善， 各種營養缺乏性疾病已大為減少， 但缺鐵性貧血仍然是人們所面臨的威脅健康的一大難題[3]。為了了解缺血性貧血對機體免疫系統功能的影響， 本試驗通過流式細胞儀三色免疫標記法觀察30例成人缺鐵性貧血外周血淋巴細胞免疫表型的變化， 總結出缺鐵性貧血主要影響機體的細胞免疫功能， 可引起細胞免疫功能障礙和免疫調節紊亂[4]。

　　3. 2 淋巴細胞是免疫系統的重要組成部分， 在人體細胞免疫中發揮核心作用。T 細胞免疫主要通過T 細胞的增殖分化來實現， 這是一個消耗能量、依賴核酸及蛋白質合成的復雜過程[5]。CD3+ CD4+ T 細胞是輔助性/誘導性T淋巴細胞(Th細胞)， 也是遲發性超敏反應的啟動者、促使B細胞產生抗體的輔助細胞、抑制性T淋巴細胞的誘導細胞;CD3+CD8+ T 細胞是抑制性/細胞毒性T細胞(Ts細胞)， 是細胞毒性T 細胞介導反應的效應細胞， 也是抑制B細胞產生抗體的抑制性細胞; 當CD4+/CD8+比值發生變化時， 可引起機體免疫功能降低[6]。從而影響淋巴細胞的增殖和分化， 使T淋巴細胞功能受損， 導致免疫功能低下和免疫調節紊亂[7]。

　　3. 3 缺鐵性貧血可對多系統造成危害， 但對免疫功能的具體影響具有爭議。Salaman 等[8]認為， IDA 可影響人體整個免疫系統， 使特異性和非特異性免疫功能均下降; 本研究從機體免疫功能角度出發， 分析IDA 對人體免疫功能的影響， 結果發現IDA 患者CD3+、CD3+CD4+T細胞比例減少、CD3+CD8+ T 細胞比例升高， 提示IDA影響T細胞的增殖分化， 導致細胞免疫功能障礙和免疫調節機制紊亂[9]。

　　參考文獻

　　[1] 張之南， 沈悌. 血液病診斷及療效標準. 北京： 科學出版社， 2007：6-9.

　　[2] 王建中. 流式細胞術分析血液淋巴細胞免疫表型方法學研究. 中華檢驗醫學雜志， 2000， 23(4)：203-206.

　　[3] 王臘梅， 周紅彬. 3～6歲缺鐵性貧血患兒免疫功能變化研究 . 西南軍醫， 2004， 6(4)：9-10.

　　[4] 禮征南， 王亞男， 董敏， 等. T-淋巴細胞亞群在血液病中的診斷應用. 中國醫藥前沿， 2010， 5(4)：63-64.

　　[5] 羅運貴， 包勇， 羅媛， 等. 缺鐵性貧血患兒123 例免疫功能低下相關分析. 四川醫學， 2002， 23(11)：1189-1190.

　　[6] 吳斌， 楊濱， 陳素清. 缺鐵性貧血患兒腺苷脫氨酶活性改變 . 中華血液學雜志， 1997， 18(6)：332-333.

 

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