中國動物傳染病學報最新期刊目錄

基于反向遺傳技術構建表達綠色熒光蛋白的新城疫重組病毒————作者：邱斯薇;侯岳池;張萍;劉昌海;任金蓮;陳禮斌;任濤;

摘要：本研究利用反向遺傳技術構建了一種表達增強型綠色熒光蛋白（EGFP）的新城疫病毒（NDV）Herts/33重組病毒。將EGFP基因插入Herts/33株的P基因和M基因之間，成功拯救了重組病毒rHerts/33-EGFP，并通過血凝效價（HA）和熒光顯微鏡觀察驗證其感染性。重組病毒的GFP基因整合通過PCR和測序確認，且在不同感染復數（MOI）下，GFP表達水平與感染劑量呈正相關。生物學特性測定表明...

傳染性造血器官壞死病毒RAA-LFD檢測方法的建立————作者：李迎新;陳俊貞;高馮思月;劉浩然;馬思琪;王雨;李建林;史慧君;付強;徐亞芳;

摘要：為建立一種可現場快速、高效檢測傳染性造血器官壞死病毒（IHNV）的方法。本研究根據IHNV N基因的保守區域構建質粒并設計特異性引物與探針，結合重組酶介導等溫核酸擴增（RAA）與側流層析試紙條（LFD）技術，通過優化反應條件建立了IHNV的RAA-LFD檢測方法，并進行初步應用。結果顯示在引物濃度為0.313 μmol/L，溫度為37℃條件下反應25 min時可完成核酸擴增，檢測下限為1 copi...

江蘇南通地區一株GI型貓杯狀病毒的分離鑒定與遺傳進化分析————作者：趙同舟;劉福康;靜爭;劉光清;趙興緒;朱杰;

摘要：貓杯狀病毒是一種可以引起貓呼吸道疾病的一種病原，為了研究貓杯狀病毒的生物學特性以及遺傳進化的規律，我們從江蘇南通地區一只疑似貓杯狀病毒感染的貓口腔拭子中，成功分離一株貓杯狀病毒，命名為FCV NT2023株。首先，本研究利用PCR技術對臨床樣品進行核酸鑒定，結果發現FCV陽性。隨后利用貓腎上皮細胞（CRFK）對該陽性樣品進行病毒分離，結果發現接種陽性樣品的CRFK細胞出現典型的葡萄串樣病變特征。然...

新型H3N2犬流感病毒樣顆粒疫苗研制與免疫效果評估————作者：葛杰;趙洪進;王建;劉健;鞠厚斌;楊德全;李鑫;沈海瀟;葛菲菲;

摘要：犬流感病毒（CIV）感染的狗較為常發，導致病毒容易發生重排，重排流感病毒存在跨種傳播到人類的風險。前期研究結果顯示H3N2 CIV出現了新的抗原變異，目前缺少針對變異的H3N2 CIV的疫苗。本研究用重組桿狀病毒表達系統制備了H3N2 CIV病毒樣顆粒疫苗（VLPs）。通過對HA與NA密碼子優化后，其在桿狀病毒中表達量明顯增強。感染Sf21細胞后以低速離心去除宿主Sf21細胞，上清中VLPs的血凝...

豬流行性腹瀉病毒重組腺相關病毒載體疫苗的構建與初步評價————作者：唐國瑞;孟子毅;文曉曉;楊姍姍;王麗麗;李封賽;馬增軍;芮萍;宋濤;

摘要：豬流行性腹瀉（PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的一種急性高傳染性的腸道疾病。現有疫苗受自身特性限制在應用中仍存在一定的不足。腺相關病毒（AAV）因其獨特的安全性、低免疫原性和持續表達能力，近幾年來被廣泛應用于動物疫苗的開發。本研究成功表達并純化出了3種重組腺相關病毒（rAAV）：rAAV-PEDV-S1、rAAV-PEDV-CTD和rAAV-PEDV-NTD，免疫4周齡Balb/c小鼠...

貓細小病毒SYBR Green熒光定量PCR檢測方法的建立————作者：葛廣宇;陳芷藝;譚雅文;何慶華;

摘要：本研究利用貓細小病毒（FPV）VP2保守區域制備了標準質粒pUC57-VP2，針對該標準質粒建立了SYBR Green I實時熒光定量PCR（qPCR）方法，通過優化反應條件，篩選最佳引物及濃度和退火溫度的關鍵反應參數，顯著提升了擴增效率。結果表明，qPCR法最低檢出限為4.277×10¹ copies/μL，能準確識別出FPV目標核酸，與貓杯狀病毒、貓冠狀病毒、貓皰疹病毒1...

赤羽病病毒Gn桿狀病毒表達和單克隆抗體的制備————作者：余儒洋;魏方;王晶晶;陳冬杰;吳紹強;

摘要：為制備針對赤羽病病毒（Akabane virus， AKAV）Gn蛋白的單克隆抗體，本研究將目的蛋白Gn的基因序列構建至pFastBac HTB載體，通過昆蟲桿狀病毒表達系統（BEVS）制備重組AKAV Gn蛋白。將純化的重組蛋白免疫小鼠，取其脾細胞和骨髓瘤細胞（SP2/0）進行細胞融合及亞克隆，使用間接ELISA法篩選出能穩定分泌AKAV Gn蛋白的單克隆抗體（mAb）。經過Western Bl...

大腸桿菌-沙門氏菌穿梭型BAC載體的構建————作者：李琳;何可緣;陳磊;姚曉慧;李宗杰;劉珂;邵東華;邱亞峰;魏建超;馬志永;李蓓蓓;

摘要：本研究通過對細菌人工染色體（BAC）pBeloBac11的定向改造，構建了克隆大片段DNA的大腸桿菌-沙門氏菌穿梭型BAC載體pBACt3a。通過移除pBeloBac11質粒的氯霉素抗性基因cat，并引入pSC101復制子與營養缺陷型篩選標記asd基因，獲得了在大腸桿菌和沙門氏菌中均可在無抗生素壓力下，保持穩定遺傳的穿梭BAC質粒。同時，基于Red同源重組方法，構建了asd基因缺失型大腸桿菌DH1...

表達ASFV pB602L JEV復制子的構建及鑒定————作者：程星雨;肖長廣;周群;李宗杰;邵東華;劉珂;李蓓蓓;魏建超;馬志永;邱亞峰;

摘要：鑒于RNA病毒復制子可實現外源抗原基因的高水平表達，本研究選取非洲豬瘟病毒（ASFV）B602L基因，嘗試構建表達ASFV pB602L的日本乙型腦炎病毒（JEV）復制子，通過復制子瞬時轉染及構建復制缺陷病毒驗證復制子的表達情況。首先，對ASFV B602L基因進行密碼子優化，將優化后的B602L基因克隆入JEV復制子（pJEV-CMV-EGFP）中，獲得復制子pJEV-CMV-pB602L。隨后...

病毒挾持外泌體進行免疫逃逸機制研究進展————作者：張嘉家;蔡俊呈;林秋燕;任濤;陳禮斌;

摘要：外泌體作為細胞間通訊關鍵介質，通過傳遞核酸、蛋白質等組分參與多種生理病理過程。病毒通過劫持外泌體生物發生及分泌途徑促進感染與免疫逃逸。本綜述總結其三大作用機制：一是病毒將核酸或完整顆粒包裹于外泌體，借此擴大感染并促進免疫逃逸；二是利用外泌體組分削弱固有免疫；三是依賴宿主ESCRT 系統促進自身出芽及外泌體分泌，協同完成病毒釋放與免疫逃逸。盡管外泌體在病毒致病中的核心作用已被揭示，但其與病毒相互作用...

一株鴿圓環病毒的遺傳進化分析及其致病性研究————作者：鄭嘉雯;張姍;程靖華;譚磊;孫英杰;宋翠萍;廖瑛;唐寧;屈陽;劉惠莉;丁鏟;胡順林;仇旭升;劉秀梵;

摘要：本研究旨在探究一株鴿圓環病毒（PiCV）分離株的基因組遺傳變異特征及其致病性。為此，對該病毒進行全基因組測序，并運用DNAStar軟件對其基因組、Cap基因以及Rep基因進行核苷酸序列比對分析，并構建系統進化樹。使用PiCV病料研磨上清液分別通過口服和肌肉注射兩種途徑對乳鴿進行感染研究，隨后監測攻毒后乳鴿的體重變化情況。攻毒后第7d和第14d各剖殺鴿子3只，選取肝臟、十二指腸、肺臟、胰腺、盲腸、腎...

2021-2023年云南省豬偽狂犬病病毒流行情況調查與病毒分離鑒定————作者：唐佳睿;胡瑜洋;劉雪姣;王藝錦;鄭詩玲;管泉源;譚磊;李娟;黃翠琴;

摘要：為初步調查云南省豬偽狂犬病病毒流行情況及流行株基因型，于2021-2023年從云南省部分地區的1025個豬場采集21 238份健康豬群血清樣品和1757份疑似感染PRV豬組織樣品，選用商業化ELISA試劑盒檢測血清樣品PRV-gE抗體陽性率，并統計不同年份和季節來源樣品陽性率；采用qPCR法檢測組織樣品中PRV核酸，從陽性病料中分離獲得病毒，初步探究其生物學特性。結果發現，71個豬場的893份血清...

基于酵母轉化重組的豬德爾塔冠狀病毒反向遺傳系統的構建————作者：孫琳舒;程群;劉甜;楊心雨;秦文珍;孔寧;單同領;李有文;

摘要：豬德爾塔冠狀病毒（Porcinedeltacoronavirus，PDCoV）是一種新型豬腸道冠狀病毒，感染仔豬后可引起腹瀉、嘔吐、死亡等臨床癥狀，是影響養豬業發展的重要病原之一。然而，由于冠狀病毒基因組龐大，在大腸桿菌中復制不穩定，構建冠狀病毒感染性克隆仍是一個難題。為了克服這一難題，我們利用基于酵母轉化體外重組的反向遺傳操作系統構建了PDCoV 的感染性克隆。拯救出的病毒在體外具有與野生型病毒...

炭疽桿菌微滴數字PCR檢測方法的建立與初步應用————作者：姜子昕;薛瑞雪;邢林林;胡莉萍;蔣文奪;李俊華;蘭鄒然;張月;

摘要：本研究旨在建立一種炭疽桿菌的痕量檢測方法，可應用于突發炭疽疫情、流行病學調查以及公共衛生事件的早期、快速、精準診斷。通過設計并合成針對炭疽桿菌pXO2基因的引物對與熒光標記探針，構建質粒標準品，系統優化探針與引物濃度、反應體系試劑組分等關鍵參數，成功建立了可檢測炭疽桿菌pXO2基因的微滴數字PCR方法。對該方法的靈敏度與特異性進行測試，并將其應用于實際檢測場景。結果顯示，微滴數字PCR檢測炭疽桿菌...

我國部分地區鵝星狀病毒基因組序列及遺傳進化分析————作者：李杰;胡峰;于可響;呂俊峰;劉麗萍;黃兵;馬秀麗;秦卓明;李玉峰;王建琳;

摘要：鵝星狀病毒（GAstV）是造成雛鵝痛風的主要病原，但是目前對其流行情況及其遺傳進化及變異規律了解甚少。本實驗從我國不同地區采集病料，進行病原鑒定、全基因組測序、遺傳進化分析。結果顯示，獲得的10株GAstV全基因組核苷酸序列同源性為97.1%～99.9%。通過全基因組以及3個閱讀框遺傳進化分析顯示10株GAstV均為GAstV-2-Ⅱ-c亞型，與我國2019年以后流行的鵝星狀病毒基因亞型基本一致。...

大腸桿菌表達的重組豬源G-CSF在小鼠上的生物學活性分析————作者：劉麗萍;劉云;虞凌雪;李國新;倪迎冬;

摘要：粒細胞集落刺激因子（G-CSF）是一種多肽類生長因子，其主要作用是促使大量骨髓前體細胞的動員。G-CSF 具有良好的生物活性，被廣泛用于免疫學研究。在本研究中，通過對豬源粒細胞集落刺激因子（PG-CSF）基因進行密碼子優化，構建了重組質粒pColdI-PG-CSF。將pColdI-PG-CSF轉染到大腸桿菌BL21（DE3）中，用 IPTG誘導重組豬粒細胞集落刺激因子的表達并純化。SDS-PAGE...

穩定表達PEDV N蛋白的Vero細胞系和PK1細胞系的構建————作者：劉甜;程群;孫琳舒;楊心雨;秦文珍;孔寧;單同領;李有文;

摘要：為深入研究豬流行性腹瀉病毒（PEDV）核衣殼（N）蛋白的生物學特性，以及建立反向遺傳操作平臺，本研究成功構建了穩定表達PEDVN蛋白的非洲綠猴腎細胞（Vero）系和豬腎細胞（PK1）系。本研究將PEDVN基因克隆至慢病毒載體pLVX-EF1a-IRES-Puro，通過同源重組法獲得重組質粒pLVX-PEDV-N，利用慢病毒包裝系統包裝出能夠表達PEDVN蛋白的慢病毒顆粒，然后分別感染Vero和 P...

一株C亞型禽偏肺病毒的分離、鑒定和致病性研究————作者：宋曉飛;李振;王磊;彭建云;汪建華;許明清;鄭蕊蕊;趙妮;賈愛琴;劉華春;張連秀;

摘要：為了研究我國部分白羽肉種鴨和蛋鴨產蛋下降是否與禽偏肺病毒有關，我們從山東、江蘇、內蒙古等地的發病鴨場采集病料，進行了病毒分離鑒定、透射電鏡觀察、全基因組測序、遺傳進化樹分析和致病力試驗。結果顯示：成功分離出一株禽偏肺病毒，接種Vero細胞、BHK細胞、DF1細胞后出現細胞病變（CPE）。測序分析該病毒全基因組全長14 152 bp，遺傳進化分析表明為C亞型禽偏肺病毒。動物試驗結果表明，3周齡SPF...

枝睪闊盤吸蟲FABP基因的原核表達及多克隆抗體制備————作者：李聞靜;苗壯;周芳芳;孫淑雯;李芬;

摘要：對枝睪闊盤吸蟲（Eurytremacladorchis）的脂肪酸結合蛋白（FABP）進行原核表達與鑒定，并制備鼠抗EcFABP多克隆抗體。方法 通過PCR技術擴增了含開放閱讀框（ORF）的EcFABP序列，構建重組表達質粒pET-28a-EcFABP。IPTG誘導EcFABP重組蛋白表達并進行最佳誘導時間優化。將純化后的重組蛋白與弗氏佐劑等比例乳化后免疫BALB/c小鼠，制備多克隆抗體，經ELIS...

禽流感病毒H1N1亞型NA蛋白單克隆抗體的制備與鑒定————作者：呂雪華;牛世奇;潘晟輝;張云翔;潘學;張志飛;許榜豐;閆鳴昊;閆大為;滕巧泱;苑純秀;李澤君;劉芹防;

摘要：流感病毒是分節段的負鏈RNA病毒，高致病性禽流感病毒可導致嚴重的致死性疾病，已給全球禽類養殖及相關產業造成了巨大損失，并對人類健康造成了極大威脅，流感病毒表面的NA蛋白與流感病毒的功能息息相關，NA蛋白由RNA片段6編碼，NA蛋白的主要作用是在新生病毒粒子從細胞膜表面出芽的階段切割病毒和細胞膜糖蛋白的SA結合以避免病毒粒子的聚集從而從被感染細胞表面釋放。為獲得NA單克隆抗體為后續實驗提供幫助，本實...

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